Tot plegat, els microscopis sofisticats i ben equipats no produeixen imatges excel·lents a causa de l’ús incorrecte de la font de llum, que sol conduir a una il·luminació de mostra inadequada. Quan s’optimitzi, la il·luminació de l’exemplar ha d’estar brillant, sense brillantor i dispersa uniformement en el camp de vista.
Hi ha nombroses fonts de llum disponibles per il·luminar els microscopis, tant per a l'observació rutinària com per la fotomicrografia crítica. Una font de llum més comuna, a causa del seu baix cost i la seva llarga vida, és la làmpada halogen de tungstè de 50 o 100 watts, tal com es mostra a la base del diagrama del microscopi de la figura 1, que també detalla les vies òptiques en un microscopi de llum transmès modern típic. En aquesta figura, la làmpada de túngstè-halògens emet un espectre continu de llum centrada a 3200 K (quan es fixa en una tensió de làmpada de {+9 volts), que després es passa per un col·lector i una lent de camp abans de reflectir-se al condensador de subjecció i a l'espècimen. Els raigs de llum que formen imatges són capturats per l'objectiu del microscopi i es passen als oculars o dirigits per un feix de feixos cap a un dels diversos ports de càmera. Al llarg de la via òptica del microscopi, la il·luminació es dirigeix i es centra a través d’una sèrie de diafragmes i lents a mesura que viatja des de la font per il·luminar la mostra i després cap a les oculars o l’adhesió de la càmera. L’alineació dels components òptics d’un microscopi per optimitzar la il·luminació en microscopis moderns es realitza seguint les regles d’il·luminació de Köhler. Més detalls sobre com s’alineen els microscopis de llum transmesa i reflectida per a la il·luminació de correctaköhler discutida a les nostres seccions sobre la configuració d’un microscopi fortransmited Lighttandlected Light. Les vies òptiques mostrades anteriorment a la figura 1 són típiques per a un microscopi de llum transmès i impliquen diverses lents, diafragmes, miralls i feixos per dirigir la llum al microscopi.
Les làmpades de túngstè-halògens són relativament brillants amb un espectre de color centrat a 3200 K (quan s’estableixen aproximadament +9 volts), però requereixen filtres de conversió de color per augmentar la temperatura de color a l’equivalència de la llum del dia. Una altra font de llum popular és la làmpada de xenó de 75 a 150 watts a causa de la seva gran brillantor i la seva llarga vida, una sortida relativament uniforme a través de l’espectre visual i una temperatura de color que s’aproxima a les emulsions de la llum del dia. Quan es requereix una intensitat de llum molt elevada, sovint s’utilitzen làmpades de llauna. Sovint s’utilitzen els cremadors de mercuri de 100 watts o 200 watts d’afluència, particular per a la fotomicrografia crítica, els cremadors de mercuri de 100 watts o 200 watts. Antigament, es podrien haver utilitzat llums d'arc de carboni o bombetes de zirconi, però avui en dia aquestes fonts es veuen. Per obtenir més informació i una discussió detallada de l’ampli espectre de làmpades disponibles per a la il·luminació del microscopi, visiteu les nostres fonts de secció per a la microscòpia i la fotomicrografia.
L’alineació de la il·luminació de la font a través de vies òptiques en microscòpia de llum reflectida també és de preocupació primària, particular pel que fa a la metal·lografia, la inspecció d’hòsties de semiconductor i el notable nou progrés en microscòpia de fluorescència. Els microscopis de llum reflectits també s’il·luminen amb diverses fonts de llum (com s’ha comentat anteriorment) i es poden ajustar per obtenir un rendiment òptim mitjançant la il·luminació de Köhler. Això es discuteix amb més detall a la nostra secció sobre la configuració de la il·luminació de Köhler per a la microscòpia de llum reflectida. Les vies d’il·luminació per a la microscòpia de llum reflectida també són el tema de diversos tutorials interactius de Java, inclòs el que s’enllaça directament a continuació.
En el seu excel·lent llibre "Fotografia a través del microscopi", John Dellyargues que entre el 80 i el 90 per cent de totes les fotomicrografies presentades a concursos, exposicions i publicacions científiques són víctimes d'òptica alineada de manera inadequada i es tradueix en una mala il·luminació de mostres. Aquest és un dels problemes més habituals amb la microscòpia i la fotomicrografia en general, i un examen sorpresa dels microscopis estudiantils en molts laboratoris universitaris revelarà una abundància de condensadors i fonts d’il·luminació poc ajustades. Sospitem que l’alineació i l’ajust incorrectes tant del condensador de substa i del diafragma de camp, a tota la gamma d’objectius en un microscopi determinat, són la font més gran d’errors en la fotomicrografia.
La necessitat de la il·luminació adequada no es pot sobreeixir. Amb massa freqüència, un microscopi de 25 dòlars, 000 es redueix al nivell d’un magnificador de mà mitjançant il·luminació i alineació inadequades, donant lloc a fotomicrografies que es superen els presos amb un microscopi de 2000 dòlars en condicions òptimes d’il·luminació de Ofköhler. A les seccions d’acompanyament d’aquest primer que tracta de la teoria de la il·luminació de Köhler i de la seva implementació (ambdues fortransmitedAndreflectedlight) es discuteixen aspectes crítics de la configuració del microscopi i hem inclòs una varietat d’interacció
